1. 許婷安 (女主)
- 身份：原江南書香世家之女，後入宮為婢，最終晉升為尚藥局「掌藥女官」。
- 性格：清冷孤傲、心思縝密、處事冷靜。在逆境中展現出極強的韌性與洞察力。
- 關鍵作用：憑藉卓越的藥理知識，發現了李軒程暴斃的真相。她通過對細微線索（如幽蘭草、玄色布料、山水畫暗號）的追查，最終揭開了李貴妃的陰謀，並為家族洗清了冤屈。故事結尾，她選擇回歸民間，懸壺濟世。
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2. 蕭景睿 (男主)
- 身份：大周王朝太子。
- 性格：沉穩內斂、心懷天下、知人善任。雖然身處權力漩渦，但始終保持清醒與正義感。
- 關鍵作用：許婷安在宮中的暗中支持者。他多次給予許婷安提示（如「不同的眼睛」），並在關鍵時刻保護她免受李貴妃毒手。最終，他與許婷安聯手在皇帝面前揭發陰謀，並登基開創盛世。
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3. 李貴妃 (女反派)
- 身份：皇帝寵妃，膝下有一子。
- 性格：美艷動人、野心勃勃、手段殘忍。
- 關鍵作用：故事的幕後黑手。她為了讓自己的兒子登上儲君之位，與「玄武門之變」的餘孽勾結，策劃了李軒程與翠兒的命案，試圖嫁禍太子。最終陰謀敗露，被廢入冷宮。
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4. 柳玉如 (女配角)
- 身份：尚食局「掌膳女官」，許婷安在宮中唯一的摯友。
- 性格：活潑開朗、心地善良、略顯天真。
- 關鍵作用：許婷安的情報來源，為其提供了關於翠兒與幽蘭草的重要線索。她多次協助許婷安出入禁地，是許婷安在冰冷深宮中唯一的溫暖支撐。結尾隨許婷安出宮，共同經營醫館。
5. 高公公 (男配角)
- 身份：皇帝身邊的貼身大太監。
- 性格：深不可測、圓滑老練、亦正亦邪。
- 關鍵作用：宮中的「平衡者」。他雖然表面效忠皇帝，但暗中觀察局勢，多次在關鍵時刻點撥許婷安，並在李貴妃追殺許婷安時救其一命，引領其見到太子。
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6. 李軒程
- 身份：東宮太子侍讀，青年才俊。
- 關鍵作用：因發現李貴妃與餘孽勾結的秘密而被毒殺。他在臨死前留下的山水畫，成為了許婷安破解冷宮秘密的關鍵密碼。
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7. 翠兒
- 身份：東宮宮女，負責膳食。
關鍵作用：被李貴妃利用作為下毒的工具，後因知道太多秘密被滅口。她死前指甲縫留下的布料纖維，成為指向李貴妃的重要物證。
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